USP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403543-ACT

A peptidase específica de ubiquitina 4 (USP4) é uma enzima desubiquitinante que regula a estabilidade proteica e a saída de sinalização ao remover cadeias de ubiquitina de substratos-alvo. Em células humanas, a USP4 modula vias-chave, incluindo a sinalização de TGF-β/SMAD, respostas inflamatórias ligadas a NF-κB e o tráfego de receptores, influenciando assim programas transcricionais, a proteostase e processos adaptativos ao estresse. Por meio de seus efeitos sobre a degradação dependente de ubiquitina, a USP4 contribui para o controle da proliferação celular, da apoptose e da dinâmica da sinalização imune. A atividade ou expressão desregulada de USP4 tem sido associada a alterações na homeostase de sinalização na biologia do câncer e em mecanismos de doenças inflamatórias, tornando-a um nó relevante para a investigação de vias.

USP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP4 em células tumorais com expressão de USP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.