USP34 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421760-ACT

O gene murino **Usp34** codifica a **USP34**, uma protease específica de ubiquitina que remove cadeias de ubiquitina de proteínas-alvo para regular sua estabilidade e a saída de sinalização. A USP34 tem sido associada ao controle da via **Wnt/β-catenina** por meio da desubiquitinação de componentes-chave da via, influenciando assim programas transcricionais que governam proliferação, diferenciação e homeostase tecidual. Ao ajustar a proteostase dependente de ubiquitina, a USP34 também impacta respostas a danos no DNA e redes de sinalização adaptativas ao estresse que moldam decisões de destino celular. A atividade desregulada de USP34 e a sinalização Wnt são frequentemente estudadas na biologia do câncer e em fenótipos do desenvolvimento, tornando **Usp34** um nó relevante para a investigação mecanística de vias em modelos murinos.

USP34 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Usp34 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP34 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Usp34 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Usp34, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP34. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Usp34 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP34 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP34 em células tumorais com expressão de Usp34 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.