USP3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404849-NIC

ヒトUSP3は、ユビキチン特異的プロテアーゼをコードしており、ユビキチン化を解除することでタンパク質の安定性やシグナル伝達の忠実性を調節します。USP3は、クロマチン関連基質の脱ユビキチン化とゲノム維持プログラムの統合に関与することで最もよく知られており、ユビキチンシグナルをDNA複製ストレス応答やDNA損傷修復と結び付けています。これらの働きを通じて、USP3は細胞周期の進行やクロマチン動態に影響を与えます。これらの過程は、増殖性疾患や腫瘍生物学においてしばしば攪乱されるものです。USP3の発現や機能の変化は、ユビキチン恒常性の破綻やゲノム不安定性と関連付けられており、DNA修復不全が関与するがんなどの疾患の機構研究において重要な表現型として報告されています。

USP3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における USP3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、USP3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、USP3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、USP3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。