USP24 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411721-ACT

O USP24 humano codifica uma protease específica de ubiquitina que remove grupos de ubiquitina de proteínas substrato, moldando a proteostase ao regular a estabilidade dos substratos, o seu tráfego intracelular e o resultado da sinalização. Como componente do sistema ubiquitina–proteassoma, o USP24 influencia respostas ao stress celular, a sinalização de danos no DNA e o controlo de checkpoints ao modular a degradação de proteínas reguladoras-chave. Alterações na dinâmica de desubiquitinação envolvendo o USP24 têm sido associadas a progressão desregulada do ciclo celular, sinalização apoptótica aberrante e remodelação de vias inflamatórias em contextos relevantes para a doença. Estas propriedades fazem do USP24 um alvo útil para dissecar o controlo dependente de ubiquitina sobre programas transcricionais e redes de sinalização em modelos de células humanas.

USP24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP24 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP24 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP24, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP24. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP24 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP24 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP24 em células tumorais com expressão de USP24 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.