USP20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406849-ACT

O gene humano USP20 codifica uma enzima desubiquitinante (protease específica de ubiquitina 20) que remove cadeias de ubiquitina de proteínas substrato para modular sua estabilidade, localização e a saída de sinalização. Por meio da regulação da degradação dependente de ubiquitina, a USP20 influencia processos como o tráfego de receptores, a transdução de sinais inflamatórios e vias de resposta ao estresse que moldam o crescimento e a sobrevivência celular. Alterações na dinâmica de desubiquitinação envolvendo a USP20 têm sido relacionadas na literatura a redes de sinalização desreguladas relevantes para transformação oncogênica, regulação imune e disfunção metabólica, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de proteostase. Assim, o perfil funcional da USP20 pode ajudar a esclarecer como a edição de ubiquitina ajusta a amplitude e a duração das vias em células humanas.

USP20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP20 em células tumorais com expressão de USP20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.