USP11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403368-ACT

A USP11 (peptidase específica de ubiquitina 11) é uma enzima desubiquitinante que edita cadeias de ubiquitina para regular a estabilidade, a localização e a dinâmica de sinalização de proteínas. Ela contribui para o controle dependente de ubiquitina das respostas a danos no DNA, de processos associados à cromatina e da progressão do ciclo celular ao modular o estado de ubiquitinação de componentes-chave dessas vias. Por meio dessas atividades, a USP11 influencia a manutenção do genoma e redes de sinalização de estresse que são frequentemente perturbadas em doenças humanas. A expressão ou função desregulada da USP11 tem sido associada a alterações no funcionamento dessas vias na biologia do câncer e em outros contextos em que a proteostase mediada por ubiquitina e os mecanismos de reparo são críticos.

USP11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP11 em células tumorais com expressão de USP11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.