USF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423628

Visão geral

O fator de transcrição upstream 1 (USF-1), codificado pelo gene murino Usf1, é um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básica com zíper de leucina, que se liga a motivos E-box para coordenar programas de expressão gênica que controlam o metabolismo, o crescimento e respostas ao estresse. O USF-1 integra sinais celulares para regular redes transcricionais envolvidas na homeostase de lipídios e glicose, na função mitocondrial e na progressão do ciclo celular, frequentemente por meio de interações com co-reguladores e complexos modificadores de cromatina. Em sistemas murinos, alterações na atividade de Usf1 têm sido associadas a fenótipos metabólicos desregulados e a sinalização inflamatória, relevantes para estudos de características cardiometabólicas e da regulação gênica hepática. Como regulador transcricional amplamente expresso, o USF-1 é frequentemente investigado por seus papéis no controle transcricional, na comunicação entre intensificadores (enhancers) e promotores e no crosstalk entre vias que sustenta a suscetibilidade a doenças complexas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO USF-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Usf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Usf1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Usf1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína USF-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Usf1 para a investigação da sinalização de USF-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Usf1 críticos para a função USF-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Usf1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo USF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo USF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Usf1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo USF-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR USF-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Usf1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Usf1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.