urocortin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403604-ACT

O UCN humano codifica a urocortina, um neuropeptídeo secretado da família do fator liberador de corticotropina (CRF) que sinaliza principalmente por meio de CRHR2 e CRHR1 para modular programas transcricionais dependentes de cAMP/PKA. A urocortina participa das respostas neuroendócrinas ao estresse e coordena processos celulares, incluindo secreção, adaptação metabólica e sinalização inflamatória em tecidos centrais e periféricos. Por meio das vias dos receptores de CRH, o UCN influencia o tônus vascular, a função gastrointestinal e a fisiologia cardíaca, relacionando sua expressão a estudos de biologia do estresse e de regulação cardiometabólica. Alterações na sinalização da urocortina têm sido investigadas em contextos como fenótipos associados a ansiedade e depressão, insuficiência cardíaca e condições inflamatórias, sustentando pesquisas mecanísticas sobre a desregulação do eixo CRH.

urocortin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UCN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

urocortin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UCN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UCN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de urocortin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UCN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de urocortin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via urocortin em células tumorais com expressão de UCN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.