URB Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408597-LAC

CCDC80 codifica a proteína URB, secretada e associada à matriz extracelular, que contribui para a sinalização do estroma e para a organização da matriz, podendo influenciar a adesão celular, a migração e a remodelação tecidual. A URB tem sido associada à regulação da adipogênese e da homeostase metabólica, e seus padrões de expressão sugerem funções na modulação de vias parácrinas que se cruzam com a sinalização inflamatória e de fatores de crescimento. Alterações nos níveis de CCDC80/URB foram relatadas em contextos de fibrose, disfunção relacionada à obesidade e múltiplos tipos de câncer, nos quais mudanças no meio extracelular podem afetar a proliferação e o comportamento invasivo. Essas características tornam o CCDC80 um alvo útil para estudar, em modelos celulares humanos, a regulação impulsionada pelo microambiente, programas de diferenciação e interações tumor–estroma.

As Partículas de Ativação Lentivirais URB (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CCDC80 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais URB (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CCDC80, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de URB. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CCDC80 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.