UPIa CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402951-ACT

ヒトUPK1Aは、ウロプラキン-1a（UPIa）をコードしており、UPIaはテトラスパン型の膜タンパク質です。UPIaは他のウロプラキンと複合体を形成して、傘細胞の頂端膜表面に硬い尿路上皮プラークを構築します。これらのプラークは上皮バリアの完全性を支えるとともに、尿路の特殊な構築を維持するための膜輸送や終末分化プログラムにも関与します。UPK1Aの発現は、分化した尿路上皮の系譜マーカーとして一般的に用いられており、その制御異常は尿路上皮のリモデリングや膀胱がんの生物学との関連で研究されています。ウロプラキン組成の変化は、細胞間相互作用や頂端膜の組織化に影響し、これらは腫瘍の表現型や上皮の可塑性に関わるプロセスです。

UPIa CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UPK1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UPIa CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UPK1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUPK1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UPIaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUPK1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUPIa依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUPK1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUPIa経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。