uPAR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400666-ACT

PLAUR codifica o receptor humano do ativador do plasminogênio tipo uroquinase (uPAR), um receptor de superfície celular ancorado por GPI que localiza a proteólise ao se ligar à uPA e coordenar a ativação do plasminogênio. Por meio de interações com integrinas, vitronectina e complexos de receptores que incluem LRP1, o uPAR modula a remodelação da matriz extracelular, a adesão celular, a quimiotaxia e a migração, conectando a atividade proteolítica pericelular a vias do citoesqueleto e de sinalização, como MAPK/ERK, PI3K/AKT e a dinâmica das adesões focais. A expressão alterada de PLAUR/uPAR está associada a fenótipos invasivos e à remodelação inflamatória em múltiplos contextos de doença, incluindo progressão do câncer, fibrose e patologia vascular. Como regulador de mudanças no microambiente impulsionadas por proteases, o uPAR é amplamente estudado em mecanismos de metástase, reparo de feridas e tráfego de células imunes.

uPAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLAUR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

uPAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLAUR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLAUR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de uPAR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLAUR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de uPAR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via uPAR em células tumorais com expressão de PLAUR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.