ULBP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403608-ACT

ULBP3 (proteína 3 ligante de UL16) é um ligante induzível por estresse, ancorado a GPI, para o recetor ativador NKG2D (KLRK1), expresso em células NK e em subpopulações de células T. Ao interagir com o NKG2D, a ULBP3 contribui para a vigilância imunológica e para a ativação de linfócitos citotóxicos em contextos de estresse celular, respostas a dano no DNA e transformação maligna. A sua expressão é modulada por sinais inflamatórios e por vias de estresse que influenciam o reconhecimento e a eliminação, independentes de antigénio, de células anormais. Alterações na regulação da ULBP3 foram descritas em múltiplos tipos de cancro e em condições mediadas pelo sistema imunitário, sustentando a sua utilização como um indicador mecanístico de evasão imunitária e de interações tumor–sistema imunitário.

ULBP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ULBP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ULBP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ULBP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ULBP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ULBP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ULBP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ULBP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ULBP3 em células tumorais com expressão de ULBP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.