ULBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403835-ACT

ULBP1 (proteína 1 de ligação a UL16) é uma glicoproteína de superfície celular induzível por estresse que atua como ligante do receptor ativador NKG2D (KLRK1), expresso em células NK e em subpopulações de células T. Ao interagir com o NKG2D, a ULBP1 contribui para vias de vigilância imune que detectam estresse celular, respostas a danos no DNA e sinais associados à transformação, influenciando a ativação de linfócitos citotóxicos e programas de sinalização de citocinas. Alterações na expressão e no desprendimento (shedding) de ULBP1 foram observadas em diversas neoplasias e em contextos inflamatórios, nos quais mudanças na disponibilidade de ligantes de NKG2D podem modular mecanismos de reconhecimento imune e de evasão. Assim, a ULBP1 é um modelo útil para estudar checkpoints imunorregulatórios na interface entre células sob estresse e populações efetoras citotóxicas.

ULBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ULBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ULBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ULBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ULBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ULBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ULBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ULBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ULBP1 em células tumorais com expressão de ULBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.