UGT2B10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404210-ACT

UGT2B10 codifica uma UDP-glicuronosiltransferase humana que catalisa a glicuronidação de substratos endógenos e xenobióticos, aumentando a sua solubilidade para eliminação por meio do metabolismo de fase II. Esta enzima associada ao retículo endoplasmático contribui para redes de desintoxicação hepáticas e extra-hepáticas que interagem com respostas ao stress oxidativo e vias de processamento de fármacos. Variações na expressão ou atividade de UGT2B10 têm sido associadas a diferenças interindividuais no metabolismo de certas aminas e de outros compostos, moldando perfis de exposição e leituras de biomarcadores. Como resultado, a UGT2B10 é frequentemente estudada em farmacogenómica, biologia química e em modelos de função hepática e homeostase metabólica.

UGT2B10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT2B10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT2B10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT2B10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT2B10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT2B10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT2B10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT2B10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT2B10 em células tumorais com expressão de UGT2B10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.