UGT1A4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402659-ACT

UGT1A4 codifica uma UDP-glicuronosiltransferase que catalisa a glicuronidação de fase II de diversos xenobióticos e metabolitos endógenos, aumentando a sua solubilidade para eliminação biliar e renal. Como enzima microssomal expressa predominantemente no fígado, a UGT1A4 contribui para a desintoxicação celular e para a homeostase metabólica ao direcionar substratos para vias de conjugação com glicuronídeos a jusante da oxidação pelo citocromo P450. Variações na expressão ou na atividade da UGT1A4 têm sido associadas a diferenças interindividuais no metabolismo de fármacos e na sensibilidade a químicos, tornando-a relevante para a farmacogenómica e a investigação em toxicologia. A modulação experimental da UGT1A4 também apoia estudos sobre diferenciação hepática, metabolismo associado ao retículo endoplasmático e respostas adaptativas ao stress químico.

UGT1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT1A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT1A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT1A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT1A4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT1A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT1A4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT1A4 em células tumorais com expressão de UGT1A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.