UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423601

概要

マウスUgdhは、UDP-グルコース6-デヒドロゲナーゼ（UDP-GlcDH）をコードしており、細胞質に局在する酵素としてUDP-グルコースをUDP-グルクロン酸へと酸化します。UDP-グルクロン酸は、グリコサミノグリカンおよびプロテオグリカン生合成における主要な前駆体です。この反応により、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸の産生に必要な基質が供給され、細胞外マトリックスの組み立てとリモデリングが支えられることで、細胞接着、遊走、組織形態形成に影響します。さらにUgdh活性は、糖質代謝とUDP-糖の相互変換経路を結び付け、グリコカリックスの組成や細胞間シグナル伝達を形作ります。実験モデルでは、UDP-グルクロン酸の利用可能性やマトリックスの糖鎖修飾の異常が、発生プログラムの変化、線維化様のマトリックス変化、ならびにがんに関連した浸潤表現型と関連することが報告されています。

UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUgdh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ugdh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ugdhのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UDP-GlcDHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UDP-GlcDHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ugdh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UDP-GlcDHの機能に不可欠なUgdhエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ugdhゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ugdh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UDP-GlcDH HDRプラスミド（m）および UDP-GlcDH HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUgdhホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUgdh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。