UDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403189

概要

ヒトUNG遺伝子は、ウラシルDNAグリコシラーゼ（UDG）をコードしており、シトシンの脱アミノ化や複製時のdUMPの誤取り込みによってDNA中に生じたウラシルの除去を開始する、塩基除去修復（BER）の主要酵素である。UNGはウラシルを切り出して下流の処理に供するアバシック（塩基欠損）部位を形成することで、核およびミトコンドリアの両ゲノムにおけるゲノム安定性の維持に寄与し、変異原性を抑制する。さらにUNG活性は、複製ストレス応答、DNA損傷シグナル伝達、脱アミノ化に起因する損傷を抑える経路と連携しており、抗体多様化に関わる過程や、レトロウイルスDNAに対する自然免疫的な制限機構にも関連する。ウラシル修復およびそれに伴う修復中間体の制御異常は、変異負荷の増大やゲノム不安定性の表現型と関連づけられており、がん生物学、免疫学、宿主—病原体相互作用の分野で研究されている。

UDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUNG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UNG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UNGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UDGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UDGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UNG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UDGの機能に不可欠なUNGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UNGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUDG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UNG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UDG HDRプラスミド（h）および UDG HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUNGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUNG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。