UCP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400866-ACT

A UCP3 humana (proteína desacopladora 3) é um transportador da membrana interna mitocondrial que modula o vazamento de prótons e influencia a eficiência de acoplamento da fosforilação oxidativa, moldando a produção de ATP, o equilíbrio de espécies reativas de oxigênio e a geração de calor em tecidos metabolicamente ativos. Ela está fortemente ligada à oxidação de ácidos graxos e ao controle de qualidade mitocondrial, com papéis na regulação do uso de substratos durante estresse nutricional e alto fluxo lipídico. A expressão alterada de UCP3 tem sido associada à resistência à insulina, à disfunção metabólica ligada à obesidade e a fenótipos mitocondriais no músculo esquelético, sustentando seu uso como um ponto de estudo da homeostase energética. Portanto, a UCP3 é relevante para vias que integram a respiração mitocondrial, o processamento de lipídios e a sinalização redox no metabolismo celular e do organismo.

UCP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UCP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UCP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UCP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UCP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UCP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UCP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UCP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UCP3 em células tumorais com expressão de UCP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.