UBXD4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-414883-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- UBXD4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- UBXD4ダブルニカースプラスミド（h）およびUBXD4ダブルニカースプラスミド（h2）は、UBXN2Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
UBXD4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-414883-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBXD4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-414883-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBXN2Aは、AAA+ ATPアーゼであるp97/VCPと相互作用してユビキチン依存的なタンパク質品質管理を協調的に制御する、UBXドメイン含有補因子UBXD4をコードする。UBXD4は、小胞体関連分解（ERAD）、プロテアソーム連関のタンパク質分解、およびストレス条件下における細胞プロテオスタシスの維持に関与するとされる。これらの過程を通じて、UBXD4は制御タンパク質の安定性や、ミスフォールド／損傷タンパク質種の処理・解消に影響しうる。p97アダプターネットワークやユビキチン–プロテアソーム系の破綻は、神経変性疾患やがんに関連するプロテオスタシス異常と広く結び付けられており、UBXN2Aは作用機序の解明に向けた研究対象として重要である。
UBXD4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBXN2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBXN2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBXN2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBXN2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。