Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400526

Visão geral

O gene humano **UBB** codifica a ubiquitina, uma proteína altamente conservada de 76 aminoácidos que é ligada covalentemente a substratos para regular o destino das proteínas e a sinalização. A ubiquitinação controla a degradação pelo proteassoma e a sinalização não proteolítica por meio de cadeias ligadas em K48 e K63, modulando vias que incluem controle de qualidade proteica, respostas a danos no DNA, progressão do ciclo celular, endocitose e sinalização da imunidade inata. A homeostase da ubiquitina e a proteostase dependente de ubiquitina estão intimamente ligadas às respostas celulares ao estresse, e sua desregulação é frequentemente implicada em neurodegeneração, biologia do câncer e fenótipos inflamatórios. Como o **UBB** contribui para o pool celular de ubiquitina, alterações na sua expressão podem influenciar a disponibilidade global de ubiquitina e a dinâmica subsequente do sistema ubiquitina–proteassoma.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UBB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UBB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UBB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ubiquitin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UBB para a investigação da sinalização de Ubiquitin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UBB críticos para a função Ubiquitin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UBB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Ubiquitin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UBB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ubiquitin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Ubiquitin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UBB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UBB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.