UBF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400521

Visão geral

UBTF codifica o fator de transcrição de ligação a montante (UBF), uma proteína de ligação ao DNA do tipo “high-mobility group” (HMG box) essencial para a transcrição do DNA ribossômico dependente da RNA polimerase I. O UBF ajuda a organizar a cromatina de rDNA, promove a formação do complexo de pré-iniciação da Pol I e sustenta a estrutura nucleolar e a biogênese de ribossomos, conectando-se assim ao controle do crescimento celular e à proteostase. Por meio de seu papel na sinalização de estresse nucleolar e da coordenação com vias do ciclo celular e de resposta a dano no DNA, alterações na atividade de UBTF/UBF podem influenciar a proliferação e a estabilidade do genoma. A desregulação da transcrição pela Pol I e da função nucleolar é uma característica recorrente da biologia do câncer e também tem sido implicada em contextos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UBF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UBTF em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UBTF, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UBTF na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UBF.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UBTF para a investigação da sinalização de UBF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UBTF críticos para a função UBF
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UBTF para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UBF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo UBF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UBTF. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UBF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR UBF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UBTF para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UBTF definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.