UBE2G2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404851-ACT

UBE2G2 (enzima conjugadora de ubiquitina E2 G2) é uma ligase humana E2 de ubiquitina–proteína que transfere ubiquitina de enzimas E1 para ligases E3, permitindo a ubiquitinação de substratos e a subsequente degradação proteassomal. Desempenha um papel proeminente na degradação associada ao RE (ERAD) e no controle de qualidade proteica, coordenando-se com complexos E3 ancorados à membrana para remover proteínas mal dobradas ou regulatórias e manter a proteostase. Por meio dessas funções, a UBE2G2 se relaciona com respostas ao estresse celular, controle do ciclo celular e vias de sinalização que dependem da renovação mediada por ubiquitina. A atividade desregulada do sistema ubiquitina–proteassoma e alterações na capacidade de ERAD estão frequentemente ligadas à biologia do câncer e a defeitos de proteostase relevantes para a neurodegeneração, tornando a UBE2G2 um ponto útil para estudos mecanísticos de homeostase proteica.

UBE2G2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UBE2G2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UBE2G2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UBE2G2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UBE2G2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UBE2G2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UBE2G2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UBE2G2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UBE2G2 em células tumorais com expressão de UBE2G2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.