UBE2E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406437

概要

UBE2E2は、E1酵素で活性化されたユビキチンをE3リガーゼへと受け渡すE2ユビキチン結合酵素をコードしており、基質のユビキチン化およびプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持を支えます。ユビキチン–プロテアソーム系における役割を通じて、UBE2E2はタンパク質のターンオーバー、ストレス応答、ならびに制御されたユビキチン化に依存するシグナル伝達ノードの調節に影響します。ユビキチン化能の変化は、細胞周期進行やDNA損傷応答を司る経路に影響し得るため、UBE2E2の機能不全は、がん原性シグナルや細胞恒常性に関わる表現型と結び付けられます。そのためUBE2E2は、ユビキチン依存的な制御の調節因子として、またより広範なタンパク質品質管理ネットワークの構成要素として、しばしば研究対象となっています。

UBE2E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBE2E2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBE2E2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBE2E2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBE2E2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBE2E2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBE2E2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBE2E2の機能に不可欠なUBE2E2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBE2E2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBE2E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUBE2E2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBE2E2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBE2E2 HDRプラスミド（h）および UBE2E2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBE2E2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBE2E2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。