TTI1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404313-ACT

TTI1 (proteína 1 de interação com TELO2) codifica um componente central do complexo TTT (TTI1–TTI2–TELO2), um coaperon especializado que dá suporte à maturação, estabilização e montagem das quinases relacionadas à fosfatidilinositol 3-quinase (PIKKs). Em coordenação com a HSP90, a TTI1 ajuda a manter a proteostase e a competência de sinalização de membros-chave da família PIKK, incluindo mTOR, ATM e ATR, influenciando assim a resposta a danos no DNA, o manejo do estresse replicativo, o controle de checkpoints e a sinalização relacionada ao crescimento. Alterações na homeostase de PIKKs dependente de TTI1 podem modificar vias de estabilidade genômica e redes de sinalização adaptativas ao estresse. Esses processos são amplamente relevantes para mecanismos subjacentes à biologia do câncer, a fenótipos do neurodesenvolvimento e a distúrbios associados a reparo de DNA deficiente ou à desregulação da via de mTOR.

TTI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTI1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTI1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTI1 em células tumorais com expressão de TTI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.