Plasmide Double Nickase (h) TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1: sc-400458-NIC

NKX2-1 code TTF-1 (thyroid transcription factor 1), un facteur de transcription à homéoboîte se liant à l’ADN, qui oriente la spécification de lignée et les programmes de différenciation dans la thyroïde, le poumon et le prosencéphale ventral. TTF-1 régule l’identité épithéliale et l’organogenèse en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la morphogenèse, les voies de biosynthèse hormonale dans le tissu thyroïdien et l’expression des gènes du surfactant pulmonaire dans l’épithélium des voies aériennes et des alvéoles. Par ses interactions avec des cofacteurs et des complexes de régulation de la chromatine, NKX2-1 intègre des signaux développementaux afin de maintenir des états d’expression génique spécifiques des tissus. La dérégulation de NKX2-1 est impliquée dans des troubles congénitaux du développement et est fréquemment étudiée en biologie du cancer en tant que régulateur associé à la lignée dans les tumeurs thyroïdiennes et pulmonaires.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NKX2-1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NKX2-1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NKX2-1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NKX2-1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.