TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400458-NIC

NKX2-1 codifica o TTF-1 (fator de transcrição da tiroide 1), um fator de transcrição homeobox de ligação ao DNA que orienta a especificação de linhagens e programas de diferenciação na tiroide, no pulmão e no prosencéfalo ventral. O TTF-1 regula a identidade epitelial e a organogénese ao coordenar redes transcricionais que controlam a morfogénese, vias de biossíntese hormonal no tecido tiroideu e a expressão de genes do surfactante pulmonar no epitélio das vias aéreas e dos alvéolos. Por meio de interações com cofactores e complexos reguladores da cromatina, o NKX2-1 integra sinais do desenvolvimento para manter estados de expressão génica específicos de cada tecido. A desregulação de NKX2-1 está implicada em perturbações congénitas do desenvolvimento e é frequentemente estudada em biologia do cancro como um regulador associado à linhagem em tumores da tiroide e do pulmão.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NKX2-1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NKX2-1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NKX2-1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NKX2-1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.