TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400458-ACT

NKX2-1 codifica o fator de transcrição homeobox TTF-1 (também conhecido como Thyroid Transcription Factor 1), um regulador determinante de linhagem de órgãos derivados do endoderma que coordena programas transcricionais necessários para o desenvolvimento, a diferenciação e a maturação da tireoide, do pulmão e do prosencéfalo. Na tireoide, o NKX2-1 controla a expressão de genes envolvidos na biossíntese hormonal e na polaridade epitelial, enquanto no epitélio pulmonar regula a homeostase do surfactante e a maturação alveolar. O NKX2-1 integra-se a outras vias de desenvolvimento, incluindo sinalização WNT, BMP e FGF, para estabelecer e manter estados de expressão gênica específicos de tecido. A atividade desregulada de NKX2-1 está associada a fenótipos congênitos da tireoide e do sistema respiratório e é frequentemente utilizada como marcador molecular e nó funcional em estudos da biologia de doenças da tireoide e do pulmão, incluindo plasticidade de linhagem e redes transcricionais oncogênicas.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NKX2-1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NKX2-1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NKX2-1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NKX2-1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 em células tumorais com expressão de NKX2-1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.