TSPAN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404815-ACT

TSPAN1 (tetraspanina 1) é uma proteína transmembrana de quatro passagens que organiza microdomínios enriquecidos em tetraspaninas e modula a distribuição espacial, na superfície celular, de recetores parceiros, integrinas e complexos de sinalização. Por meio dessas associações, a TSPAN1 pode influenciar a adesão celular, a motilidade, o tráfego de membranas e a sinalização proliferativa, ligando-se a processos como a organização epitelial e a remodelação dinâmica da membrana plasmática. A expressão desregulada de TSPAN1 tem sido reportada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente estudada em relação à invasão, a fenótipos associados à metástase e a alterações na responsividade a vias de fatores de crescimento. A sua localização na membrana e o seu papel de scaffolding tornam-na um ponto útil para investigar o cross-talk entre recetores e a reconfiguração de vias a jusante em modelos de células humanas.

TSPAN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TSPAN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TSPAN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TSPAN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TSPAN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TSPAN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TSPAN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TSPAN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TSPAN1 em células tumorais com expressão de TSPAN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.