Trypsin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423519

概要

Prss2は、マウス膵臓で産生される分泌性セリンプロテアーゼであるトリプシン-2をコードしています。トリプシン-2はザイモーゲン（不活性前駆体）として合成され、消化や細胞外タンパク質の処理を制御するプロテアーゼカスケードの中で活性化されます。栄養素の分解にとどまらず、トリプシン-2は他のプロテアーゼを活性化したり、プロテアーゼ活性化受容体（PAR）経路を調節したりすることで、組織リモデリングや炎症性シグナルにも影響し、上皮の恒常性や自然免疫応答に下流効果をもたらします。トリプシン活性の制御破綻は、膵腺房細胞のストレス、異常なプロテアーゼ活性化、炎症性障害と関連しており、Prss2は外分泌膵の生理とプロテアーゼ駆動性病態を研究するうえで重要な結節点となります。マウスPrss2モデルは、膵臓および消化管の文脈におけるプロテオスタシス、分泌経路負荷、プロテアーゼネットワーク相互作用の機序解明に役立ちます。

Trypsin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrss2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prss2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prss2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trypsin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trypsin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prss2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trypsin-2の機能に不可欠なPrss2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prss2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trypsin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrypsin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prss2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trypsin-2 HDRプラスミド（m）および Trypsin-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrss2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrss2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。