Trx Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400746-ACT

O TXN humano codifica a tiorredoxina (Trx), uma oxidorredutase expressa de forma ubíqua que mantém a homeostase redox celular ao catalisar reações de troca ditiol–dissulfeto e ao dar suporte a sistemas de defesa antioxidante. A Trx interage com o eixo tiorredoxina redutase/NADPH e modula nós de sinalização sensíveis ao estado redox que influenciam a regulação transcricional, o dobramento proteico e a apoptose, incluindo a regulação da sinalização de estresse mediada por ASK1. Ao controlar as espécies reativas de oxigênio intracelulares e o estado redox, o TXN contribui para processos como proliferação, sinalização inflamatória e respostas celulares à hipóxia e ao dano no DNA. A atividade desregulada de TXN/Trx tem sido associada a alterações no manejo do estresse oxidativo e a fenótipos de sinalização observados em diferentes contextos, como biologia do câncer, disfunções metabólicas e neuroinflamação.

Trx O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TXN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Trx O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TXN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TXN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Trx. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TXN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Trx no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Trx em células tumorais com expressão de TXN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.