Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
TRPV5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431458
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TRPV5 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TRPV5, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TRPV5 Anticorpo (B-8): sc-398345
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRPV5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-431458 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Trpv5 codifica o TRPV5, um membro altamente seletivo para cálcio da família dos receptores potenciais transitórios do tipo vaniloide, que atua como um canal de entrada apical de Ca²⁺ em epitélios. No túbulo contorcido distal e no túbulo conector do rim de camundongos, o TRPV5 sustenta a reabsorção transcelular de cálcio e se integra ao tamponamento mediado por calbindina e à extrusão basolateral via NCX1 e PMCA, contribuindo para a homeostase sistêmica do cálcio. A atividade do canal é modulada por retroalimentação de Ca²⁺ intracelular, sinalização por fosfoinositídeos, pH e reguladores hormonais, incluindo vitamina D e PTH, ligando o TRPV5 a programas de sinalização dependente de Ca²⁺ e de transporte epitelial. A desregulação do transporte dependente de TRPV5 é relevante para estudos de hipercalciúria, suscetibilidade à nefrolitíase e fenótipos do metabolismo mineral em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRPV5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trpv5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trpv5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trpv5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRPV5.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trpv5 para a investigação da sinalização de TRPV5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trpv5 críticos para a função TRPV5
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trpv5 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TRPV5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRPV5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trpv5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TRPV5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRPV5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trpv5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trpv5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.