TRPM8 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401744-LAC

TRPM8 (membro 8 da subfamília M dos canais catiônicos de potencial receptor transitório) codifica um canal iônico permeável a Ca2+, sensível ao frio e ao mentol, que atua como um detector-chave do resfriamento ambiental e de agonistas químicos em neurônios sensoriais e em outros tipos celulares. A atividade de TRPM8 regula a excitabilidade de membrana e a sinalização de cálcio intracelular, influenciando processos downstream como sinalização por quinases, respostas transcricionais e vias de inflamação neurogênica. Além de suas funções na somatossensação, TRPM8 tem sido associado à fisiologia epitelial e neuronal e é frequentemente estudado no contexto da sinalização de dor, de mecanismos de neuropatia periférica e de alterações na homeostase de cálcio. Foi relatada desregulação da expressão de TRPM8 ou da atividade do canal em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso como um ponto de entrada molecular para estudos mecanísticos da transdução sensorial e de redes de sinalização dependentes de Ca2+.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRPM8 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TRPM8 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRPM8 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TRPM8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TRPM8. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TRPM8 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.