TRPC6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423517-ACT

Trpc6 codifica o TRPC6, um canal catiônico não seletivo, permeável a cálcio, que atua a jusante da sinalização da fosfolipase C para acoplar a estimulação de receptores ao influxo intracelular de Ca²⁺. Em células de camundongo, o TRPC6 participa da regulação da excitabilidade de membrana, da remodelação do citoesqueleto e de respostas mecanossensíveis, integrando sinais de receptores acoplados à proteína G e de receptores tirosina-quinase. A atividade do canal influencia vias dependentes de Ca²⁺, incluindo a sinalização de calcineurina/NFAT e MAPK, moldando programas de transcrição e a contratilidade celular. A desregulação da sinalização de TRPC6 tem sido associada à biologia glomerular renal e à função de podócitos, bem como a processos de remodelamento vascular e cardíaco, tornando-o relevante para o estudo da fisiopatologia impulsionada por cálcio.

TRPC6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trpc6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPC6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trpc6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trpc6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPC6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trpc6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPC6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPC6 em células tumorais com expressão de Trpc6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.