Troponin T-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423462

Visão geral

Tnnt3 codifica a troponina T do músculo esquelético de contração rápida (Troponina T-FS), um componente central do complexo de troponina do filamento fino que acopla a ligação de Ca²⁺ no citosol ao movimento da tropomiosina e ao ciclo de pontes cruzadas actina–miosina. Ao ancorar o complexo de troponina à tropomiosina, a Troponina T-FS ajuda a determinar a cinética de contração e o desempenho contrátil específico do tipo de fibra durante o acoplamento excitação–contração. A regulação de Tnnt3 se cruza com a miofibrilogênese, a manutenção do sarcômero e a sinalização dependente de cálcio que ajusta a adaptação muscular à atividade e à carga. A desregulação ou o uso alterado de isoformas da troponina T rápida é relevante para estudos de fraqueza do músculo esquelético, desorganização miofibrilar e mecanismos relacionados a doenças neuromusculares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin T-FS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnnt3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnnt3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnnt3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin T-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnnt3 para a investigação da sinalização de Troponin T-FS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnnt3 críticos para a função Troponin T-FS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnnt3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin T-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Troponin T-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnnt3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin T-FS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Troponin T-FS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnnt3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnnt3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.