Troponin I-SS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423457

Visão geral

Tnni1 codifica a isoforma de músculo esquelético lento da troponina I (Troponina I-SS), uma subunidade inibitória do complexo da troponina que regula a interação actina–miosina de maneira dependente de Ca²⁺. Ao modular a responsividade do filamento fino ao Ca²⁺ por meio de interações com a troponina C, a troponina T e a tropomiosina, a Troponina I-SS ajuda a determinar a cinética de contração e as propriedades de relaxamento em fibras oxidativas de contração lenta. A expressão de Tnni1 e a troca de isoformas estão intimamente ligadas à maturação das miofibras, à atividade neuromuscular e a vias de adaptação metabólica que moldam o desempenho muscular e a resistência. A desregulação da composição do complexo da troponina e do manuseio sarcomérico de Ca²⁺ é relevante para estudos sobre fraqueza muscular, miopatias e remodelamento no envelhecimento ou no desuso, em que a regulação contrátil alterada contribui para o declínio funcional.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin I-SS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnni1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnni1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnni1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin I-SS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnni1 para a investigação da sinalização de Troponin I-SS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnni1 críticos para a função Troponin I-SS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnni1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin I-SS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Troponin I-SS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnni1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin I-SS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Troponin I-SS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnni1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnni1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.