Troponin I-C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400466-ACT

TNNI3 は、横紋筋において細胞質 Ca²⁺ 動態をサルコメア活性化へと結び付けるトロポニン複合体の抑制性サブユニットである心筋トロポニン I をコードする。トロポニン I-C は、Ca²⁺ 依存的にトロポミオシンの配置を調節してアクチン–ミオシン相互作用を制御することで、心筋細胞の薄フィラメントにおける収縮力と弛緩キネティクスの設定に寄与する。TNNI3 の機能は、興奮–収縮連関、サルコメアの組み立て、ならびにミオフィラメントの Ca²⁺ 感受性を調整するリン酸化依存的シグナル伝達と統合されている。TNNI3 の遺伝学的・制御的な異常は、心筋症に関連する表現型や不整脈誘発機序と結び付いており、心収縮性および筋原線維ストレス応答を研究するうえで中核的な標的となっている。

Troponin I-C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNNI3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Troponin I-C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNNI3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNNI3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Troponin I-Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNNI3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTroponin I-C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNNI3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTroponin I-C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。