Troponin C slow skeletal Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423431

Visão geral

Tnnc1 codifica a troponina C de músculo esquelético de contração lenta, uma subunidade regulatória do complexo troponina que se liga a Ca2+ e acopla transientes de cálcio citosólico ao ciclo de pontes cruzadas actina–miosina no músculo estriado. Ao sofrer mudanças conformacionais dependentes de Ca2+, a TNNC1 modula o posicionamento da tropomiosina nos filamentos finos e ajusta a cinética de contração, o relaxamento e a eficiência energética em fibras de contração lenta e no coração. Essa função de sensor de cálcio integra-se às vias de acoplamento excitação–contração e de organização do sarcômero, conectando o manejo intracelular de Ca2+ à responsividade dos miofilamentos. A desregulação da TNNC1 e da sensibilidade ao Ca2+ dos filamentos finos está implicada em cardiomiopatias hereditárias e disfunção contrátil, o que sustenta seu uso em estudos de biologia sarcomérica e mecanismos de doenças musculares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin C slow skeletal (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnnc1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnnc1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnnc1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin C slow skeletal.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnnc1 para a investigação da sinalização de Troponin C slow skeletal, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnnc1 críticos para a função Troponin C slow skeletal
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnnc1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin C slow skeletal Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Troponin C slow skeletal Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnnc1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin C slow skeletal Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Troponin C slow skeletal (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnnc1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnnc1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.