Troponin CCRISPR激活质粒(h): sc-403315-ACT

人类 TNNC2 编码肌钙蛋白 C（troponin C），它是肌钙蛋白复合体中一种可结合 Ca2+ 的调节亚基，负责控制横纹肌中的肌动蛋白–肌球蛋白相互作用。肌钙蛋白 C 通过 EF-hand 结构域感知胞质内钙瞬变，从而驱动细肌丝构象变化，协调兴奋–收缩耦联与肌小节产力。TNNC2 依赖的钙信号与肌原纤维装配及肌纤维功能分化相整合，影响快肌（快缩肌）中的收缩动力学。肌钙蛋白介导的钙反应性与肌小节调控发生改变，与肌无力、肌病以及更广泛的骨骼肌功能障碍表型研究密切相关。

Troponin C CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TNNC2的表达。

Troponin C CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TNNC2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TNNC2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Troponin C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TNNC2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Troponin C的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TNNC2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Troponin C通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。