TRIP13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404006-ACT

TRIP13 (interator 13 do recetor do hormônio tireoidiano) codifica uma ATPase AAA+ que regula a dinâmica cromossômica durante a mitose e a meiose, incluindo a sinalização do checkpoint do fuso e o correto acoplamento entre cinetócoro e microtúbulos. Atua em vias que controlam a progressão do ciclo celular, a correção de erros e a estabilidade do genoma, remodelando componentes-chave do checkpoint para garantir a segregação cromossômica precisa. A atividade desregulada de TRIP13 tem sido associada à aneuploidia e a fenótipos de instabilidade cromossômica observados em múltiplos contextos de doença, o que a torna um nó útil para estudar adaptação de checkpoints e estresse proliferativo. Em modelos celulares humanos, a perturbação de TRIP13 oferece um ponto de entrada tratável para investigar mecanismos que conectam a vigilância mitótica às respostas a danos no DNA e à instabilidade associada à replicação.

TRIP13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIP13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIP13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIP13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIP13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIP13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIP13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIP13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIP13 em células tumorais com expressão de TRIP13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.