TRIM29 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402144-ACT

TRIM29 (tripartite motif containing 29) é uma proteína da família RBCC/TRIM implicada na regulação de respostas a danos no DNA, na diferenciação epitelial e na sinalização de estresse celular. Foi relatado que ela modula processos associados à cromatina e influencia vias ligadas à estabilidade do genoma, incluindo interações com redes associadas ao p53 e o recrutamento de fatores de reparo. A expressão de TRIM29 é frequentemente desregulada em múltiplos tipos de tumor, nos quais tem sido associada a alterações de proliferação, invasão e respostas ao estresse genotóxico. Essas características fazem de TRIM29 um ponto de interesse para estudar o controle transcricional, a comunicação cruzada entre vias de reparo de DNA e fenótipos oncogênicos ou supressores de tumor dependentes do contexto.

TRIM29 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM29 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIM29 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM29 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM29, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIM29. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM29 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIM29 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIM29 em células tumorais com expressão de TRIM29 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.