TRH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423505

Visão geral

Trh codifica o hormônio liberador de tireotropina (TRH), um neuropeptídeo hipotalâmico sintetizado como um pré-pró-hormônio e processado em TRH bioativo, que sinaliza por meio de receptores de TRH para regular o eixo hipotálamo–hipófise–tireoide. O TRH integra o controle neuroendócrino da liberação hipofisária de tireotropina (TSH) e influencia processos homeostáticos mais amplos, incluindo o balanço energético, a termorregulação e circuitos neurocomportamentais. No SNC, neurônios TRHérgicos fazem interface com sistemas de neurotransmissores e vias responsivas ao estresse, conectando a sinalização peptídica à excitabilidade neuronal e ao feedback endócrino. A desregulação da sinalização de TRH tem sido associada a alterações na homeostase dos hormônios tireoidianos e a fenótipos relevantes para distúrbios metabólicos e neuroendócrinos, tornando o Trh um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRH (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trh em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trh, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trh na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRH.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trh para a investigação da sinalização de TRH, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trh críticos para a função TRH
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trh para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TRH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trh. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TRH Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRH (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trh para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trh definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.