TRF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401433-ACT

TERF1 codifica o fator 1 de ligação às repetições teloméricas (TRF1), um componente central do complexo shelterin que se liga ao DNA telomérico de dupla fita e regula a homeostase do comprimento dos telômeros. O TRF1 coordena a replicação dos telômeros e a proteção das extremidades cromossômicas ao modular o acesso da telomerase e favorecer a progressão adequada da forquilha de replicação através das repetições teloméricas, limitando assim a fragilidade telomérica e a sinalização aberrante de dano ao DNA. Por meio de suas funções nas terminações cromossômicas, o TRF1 interage com vias de estabilidade genômica, incluindo respostas a dano no DNA mediadas por ATM/ATR e a segregação cromossômica mitótica. A atividade desregulada de TERF1/TRF1 tem sido associada a fenótipos de disfunção telomérica relevantes para a biologia do envelhecimento e a genômica do câncer, nos quais a manutenção telomérica alterada contribui para a instabilidade cromossômica.

TRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TERF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TERF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TERF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TERF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRF1 em células tumorais com expressão de TERF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.