TREM-2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429903-ACT

マウスのTrem2はTREM-2をコードしており、TREM-2はミクログリアやその他の骨髄系（ミエロイド系）細胞に豊富に発現する免疫受容体で、生存、走化性、および脂質や細胞デブリの貪食クリアランスを支える。アダプター介在性シグナル伝達（主にTYROBP/DAP12を介する）を通じて、下流のSYK依存性経路を活性化し、炎症のトーン、脂質感知、代謝リプログラミングを形作る。TREM-2活性は、組織損傷やリモデリングの過程におけるミクログリアの状態遷移を調節し、神経炎症・神経変性の研究で広く解析されているほか、末梢組織におけるマクロファージ生物学においても重要視されている。TREM-2シグナルの変化は、自然免疫応答の調節異常、デブリ除去能の低下、ならびに疾患に関連するミクログリアの転写プログラムの変容と関連づけられている。

TREM-2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Trem2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TREM-2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Trem2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTrem2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TREM-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTrem2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTREM-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTrem2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTREM-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。