TRC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429220

概要

Rnf139は、小胞体（ER）に局在する多回膜貫通型のE3ユビキチンリガーゼであり、RINGフィンガードメインを有するTRC8をコードしています。TRC8は、ユビキチン依存的なタンパク質安定性の制御に関与し、ER膜における品質管理やステロール／脂質関連の制御を、より広範なプロテオスタシス経路と結び付けます。特定の基質のユビキチン化と分解（ターンオーバー）を調節することで、TRC8は細胞増殖の制御、ストレス応答、ならびにERで統合されるシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼし得ます。RNF139/TRC8を介したユビキチンシグナルの破綻は、増殖の変化やゲノム安定性の異常との関連で検討されており、マウスモデルにおける疾患関連経路の機序解析に有用です。

TRC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRnf139遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rnf139内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rnf139のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRC8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRC8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rnf139欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRC8の機能に不可欠なRnf139エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rnf139ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rnf139遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRC8 HDRプラスミド（m）および TRC8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRnf139ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRnf139標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。