TRC8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403689-ACT

ヒトのRNF139はTRC8をコードしており、TRC8は小胞体（ER）膜に多回膜貫通型で局在するタンパク質で、RING型E3ユビキチンリガーゼとして機能し、タンパク質の品質管理および分解（ターンオーバー）を調節します。TRC8はステロール感知機構とユビキチン依存的な分解過程を統合し、ER関連分解（ERAD）や、より広範なプロテオスタシス経路に影響を与えます。基質タンパク質のユビキチン化を制御することを通じて、RNF139は増殖制御、ストレス応答、膜タンパク質恒常性に関連する細胞プログラムに影響し得ます。RNF139/TRC8活性の変化は、がん生物学で観察されるゲノム再編成やユビキチンシグナルの破綻、およびそれに伴う細胞状態の移行との関連で研究されています。

TRC8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNF139の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRC8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNF139 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNF139転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRC8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNF139遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRC8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNF139発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRC8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。