Transketolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423410

概要

マウスのTktは、ペントースリン酸経路の非酸化的分岐において可逆的な炭素転移反応を触媒する、チアミンピロリン酸（TPP）依存性酵素であるトランスケトラーゼをコードします。トランスケトラーゼは糖リン酸を相互変換することで、ヌクレオチド生合成に必要なリボース-5-リン酸の産生を支えるとともに、解糖系およびペントースリン酸経路の中間体のバランスを調整し、細胞のレドックス維持や同化（アナボリック）需要を満たすのに寄与します。そのためTKT活性は、増殖性代謝、NADPH依存性プロセスを介したミトコンドリア機能および酸化ストレスへの適応、さらには炭水化物フラックスの広範な制御と関連しています。ペントースリン酸経路の流れ（ルーティング）の変化やトランスケトラーゼ発現の変動は、代謝恒常性の破綻や腫瘍関連の代謝表現型と関連付けられており、Tktは代謝リモデリングの機序を解析する研究に有用な標的となります。

Transketolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTkt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tkt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tktのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Transketolaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Transketolaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tkt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Transketolaseの機能に不可欠なTktエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tktゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Transketolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTransketolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tkt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Transketolase HDRプラスミド（m）および Transketolase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTktホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTkt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。