TRAIL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418124-ACT

ヒトTNFSF10は、TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligand：TNF関連アポトーシス誘導リガンド）をコードする。TRAILはII型膜タンパク質で、可溶性サイトカインとして放出され、デス受容体に結合して外因性アポトーシスを開始する。TRAILシグナルはカスパーゼ8および下流の実行カスパーゼを活性化し、同時にNF-κB、JNK、ミトコンドリア増幅経路とも交差して、細胞運命の決定に影響を与える。TNFSF10/TRAILの活性は、免疫監視、炎症性クロストーク、組織恒常性の制御に関与し、その破綻はアポトーシス感受性の変化や腫瘍—免疫相互作用の異常と関連する。経路上の重要なノードとして、TRAILはがん細胞の細胞死プログラム、抵抗性機構、免疫介在性細胞傷害の文脈で頻繁に研究されている。

TRAIL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFSF10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRAIL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFSF10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFSF10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRAILの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFSF10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRAIL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFSF10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRAIL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。