TRAF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401930-ACT

TRAF4 (fator associado ao receptor de TNF 4) é uma proteína adaptadora e uma ligase E3 de ubiquitina que coordena a transdução de sinal a jusante de múltiplas classes de receptores, incluindo receptores de citocinas e sensores da imunidade inata. Por meio de ubiquitinação regulada e de funções de andaime (scaffold), o TRAF4 influencia a dinâmica das vias NF-κB e MAPK, interage com a sinalização de TGF-β/SMAD e contribui para o controle da polaridade celular, da organização das junções e do comportamento migratório. Alterações na expressão de TRAF4 ou no equilíbrio de sua sinalização têm sido relatadas em contextos de inflamação e de remodelação de vias oncogênicas, nos quais pode modular programas transcricionais ligados à plasticidade epitelial. Como um nó em redes de sinalização próximas ao receptor, o TRAF4 é frequentemente estudado por seu papel no crosstalk entre vias, em respostas ao estresse e em fenótipos relacionados a processos de invasão e metástase.

TRAF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRAF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRAF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRAF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRAF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAF4 em células tumorais com expressão de TRAF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.