TRAF3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423494-ACT

O gene Traf3 de camundongo codifica a TRAF3, uma proteína adaptadora e ligase E3 de ubiquitina que conecta múltiplos receptores à sinalização a jusante, incluindo membros da superfamília do receptor de TNF, receptores do tipo Toll e receptores do tipo RIG-I. A TRAF3 ajuda a equilibrar a atividade canônica e não canônica de NF-κB e regula respostas de interferon tipo I dependentes de IRF3/IRF7 por meio do controle, dependente de ubiquitina, de complexos de quinases como TBK1 e IKK. Por essas vias, a TRAF3 influencia a ativação de células imunes inatas e adaptativas, a produção de citocinas e a defesa antiviral. A sinalização desregulada de TRAF3 tem sido associada a desequilíbrio imunológico e fenótipos ligados à inflamação, tornando Traf3 um nó relevante para estudos mecanísticos de sinalização proximal a receptores e de programas transcricionais em modelos murinos.

TRAF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Traf3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Traf3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Traf3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAF3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Traf3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAF3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAF3 em células tumorais com expressão de Traf3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.