TRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401467-ACT

THRB codifica o receptor beta do hormônio tireoidiano (TRβ), um receptor nuclear dependente de ligante que se liga à triiodotironina (T3) e regula a transcrição por meio de elementos de resposta ao hormônio tireoidiano. O TRβ coordena programas gênicos que controlam o metabolismo celular, a função mitocondrial, a homeostase de lipídios e carboidratos e a diferenciação do desenvolvimento, por meio de interações com corregradores e de comunicação cruzada com RXR e com as vias de sinalização MAPK/PI3K. A atividade alterada de THRB está associada à desregulação da sinalização endócrina e a fenótipos metabólicos, e perturbações em redes transcricionais mediadas por TRβ são estudadas em contextos como resistência ao hormônio tireoidiano e cânceres responsivos a hormônios. Em células humanas, o TRβ serve como um fator de transcrição modelo para investigar a ocupação da cromatina por receptores nucleares, a dependência de cofatores e a regulação gênica responsiva a estímulos.

TRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THRB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THRB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THRB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THRB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRβ em células tumorais com expressão de THRB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.