Particules Lentivirales d'Activation (h) TPPP: sc-405957-LAC

La TPPP humaine (tubulin polymerization promoting protein) est un facteur associé aux microtubules, enrichi dans les oligodendrocytes, qui favorise l’assemblage de la tubuline et stabilise les réseaux de microtubules nécessaires à l’extension des prolongements cellulaires et à la morphologie cellulaire. En modulant la dynamique du cytosquelette, la TPPP influence des programmes de différenciation liés à la myéline ainsi que des processus de transport intracellulaire dépendant de l’organisation des microtubules. Une expression altérée de la TPPP ou sa mauvaise localisation a été associée à des pathologies neurodégénératives, dans lesquelles la perturbation du cytosquelette et une agrégation protéique aberrante constituent des caractéristiques cellulaires majeures. Ces propriétés font de la TPPP un point d’entrée utile pour étudier la régulation des microtubules, la biologie des oligodendrocytes et les voies impliquées dans les dysfonctionnements neuronaux et gliaux.

Les particules d'activation lentivirales TPPP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TPPP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TPPP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TPPP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TPPP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TPPP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.